2. ХИМИЯ

2.1 Амфотерицин В

Амфотерицин В - полиеновый макролид естественного происхождения, продуцируемый определенными штаммами Streptomyces nodosus[5] (актиномицеты, выделенные из почвы, собранной в Венесуэле в 1953 году). Это противогрибковый препарат широкого спектра. Он практически не влияет на бактерии, но очень активен in vitro в отношении многих видов грибов. Большинство штаммов Histoplasma capsulatum, Coccidioides immitis, Candida spp., Blastomyces dermatitidis, Rhodotorula, Cryptococcus neoformans, Sporothrix schenckii, Mucor mucedo и Aspergillus fumigatus ингибируются in vitro при концентрациях препарата от 0.03 до 2.0 мкг/мл.

Химическая структура амфотерицина В была установлена в 1970 г. Он состоит из большого макролидного лактонного кольца из 37 атомов углерода[6] (рис. 2-1), в котором одна сторона гидрофобна благодаря коньюгированной гептановой цепи, а другая, несущая семь гидроксильных групп, гидрофильна. Таким образом, молекула амфипатична. Макролидное кольцо также содержит 6-членное кеталическое кольцо, с которым посредством аминогликозидной связи соединен аминосахарид микозамин. Амфотерицин нерастворим во многих обычных растворителях. Благодаря своей химической структуре он либо полностью разрушает двухслойные мембраны, либо формирует в них поры; в этом основа его повреждающего действия на мембраны грибов и причина его токсичности.

Рис. 2-1. Молекула амфотерицина В

Амфотерицин В представляет собой порошок желтого или оранжевого цвета без запаха и почти без вкуса. Он практически нерастворим в воде, спирте, ацетоне, хлороформе и эфире. Растворим в пропиленгликоле; в диметилформамиде растворяется в соотношении 1: 200, в метиловом спирте в соотношении 1:625. рН 3% водной суспензии колеблется от 6 до 8. В разведенном состоянии он чувствителен к свету[9], в кислой среде инактивируется.

2.2 Липосомы

Амфипатические молекулы состоят из гидрофильных головок и гидрофобных хвостов. Впервые липосомы были обнаружены в 1964 г. Ваngham с коллегами [8.9], которые наблюдали образование субмикроскопических круглых частиц при добавлении воды к сухим амфипатическим веществам, например к фосфолипидам. Вскоре было показано, что эти частицы - пузырьки, состоящие из мембран и содержащие небольшие количества воды[10]. Они послужили моделью для изучения физической химии липидного бислоя и биологии клеточных мембран. Их структура - водная сердцевина, окруженная липидным бислоем,- напоминает живую клеточную мембрану (рис. 2). Липосомы, используемые в препарате Амбизом, это очень маленькие униламеллярные пузырьки, состоящие из холестерола и очищенных фосфолипидов, боковые цепи которых представляют собой насыщенные жирные кислоты.

Рис. 2. Структура липосомы

.

Фосфолипиды в бислое подвергаются в зависимости от температуры фазовым изменениям - от состояния геля при низких температурах, до жидко-кристаллического состояния при высоких температурах[11]. В состоянии геля цепи жирных кислот плотно упакованы, при повышении температуры они становятся более подвижными, а бислой более тонким.

2.3 Aмбизом

Используемые в Амбизоме липосомальные компоненты - это амфипатические молекулы гидрогенизированного фосфатидилхолина соевых бобов (ГСФХ) и дистеароилфосфатидилглицерола (ДСФГ), которые улучшают стабильность и ригидность лекарственной формы. Холестерол, естественный компонент клеточных мембран млекопитающих, добавлен для повышения стабильности липосом, что особенно важно в плазме[12,13].

Накапливаются данные о том, что липосомальные формы лекарственных средств и вакцин по своим фармакологическим свойствам превосходят обычные лекарственные формы. Изучение липосом стимулируется их использованием в лечении болезней человека.

Водная сердцевина липосом позволяет включать в них гидрофильные вещества. Благодаря своей липофильности амфотерицин В соединяется с бислойными мембранами липосом, образуя нековалентные связи с фосфолипидами и холестеролом. Амфотерицин В встраивается в гидрофобную часть липосомального бислоя. Заданная концентрация холестерола способствует максимальному проникновению и задержке амфотерицина В в липосомальном бислое. При этом он сохраняет свою противогрибковую активность и обладает меньшей токсичностью.

Благодаря тщательному подбору соотношения заряженных липидов и компонентов липосом амфотерицин В плотно связан со стабильным липосомальным бислоем. Из-за разности зарядов аминогруппа лекарства и фосфатная группа ДСФГ соединяются. Это можно показать на P ЯМР-спектроскопии. Кроме того, происходит взаимодействие между стеароиловыми остатками ДСФГ и полиеновой частью макролидного кольца. Поскольку 18-углеродные цепи липидов гидрофобны, этот комплекс растворим в хлороформе с метанолом; он плотно, не нарушая общей структуры, упакован в бислой Амбизома.

После растворения липосом в соответствующем органическом растворителе любой компонент, включая лекарство, можно выделить и определить его количество. Возможность полного восстановления исходной структуры подтверждает, что между амфотерицином В и компонентами липосом не происходит химических реакций. Связь амфотерицина В с бислоем чисто физическая, соединение происходит через полярно заряженные пары и, в меньшей степени, посредством гидрофобных взаимодействий.

Окончательное молярное соотношение амфотерицина В и ГСФХ, холестерола и ДСФГ - 2 : 1 : 0.8 (относительная молярная концентрация амфотерицина В - 0.4).

Лекарственная форма содержит следующие компоненты: